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基因转导
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- SCIENTZ-2C基因导入仪(智能(néng)型)
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产品说明
SCIENTZ-2C基因导入仪由仪器主机、基因导入杯及连接線(xiàn)等组成。主要是利用(yòng)電(diàn)转化来将DNA转入受态细菌、动植物(wù)细胞、酵母细胞中。与其它方法相比，基因导入仪法具有(yǒu)高重复性，高效率、操作简易、可(kě)定量控制等优点，同时，電(diàn)转没有(yǒu)基因毒性，已经成為(wèi)不可(kě)缺少的分(fēn)子生物(wù)學(xué)基本技术。
工作原理(lǐ)
细胞電(diàn)转染（電(diàn)转），也叫细胞電(diàn)穿孔 (electroporation)，是把外源大分(fēn)子物(wù)质DNA、RNA、siRNA、蛋白质等以及一些小(xiǎo)分(fēn)子导入细胞膜内部的重要方法。
在瞬间强大電(diàn)场的作用(yòng)下，溶液中细胞的细胞膜具有(yǒu)了一定的通透性，带電(diàn)的外源物(wù)质以类似電(diàn)泳的方式进入细胞膜。由于细胞膜磷脂双分(fēn)子层的電(diàn)阻很(hěn)大，细胞外部電(diàn)流场产生的细胞两极電(diàn)压都被细胞膜承受，细胞质内分(fēn)到的電(diàn)压可(kě)以忽略不计，细胞质内部几乎没有(yǒu)電(diàn)流，因此也决定了正常范围内的電(diàn)转过程中细胞毒性很(hěn)小(xiǎo)。電(diàn)场使DNA等物(wù)质进入细胞膜后只能(néng)停止在细胞膜附近，随后细胞本身的机制可(kě)以允许这些物(wù)质到细胞核等处。
由于電(diàn)转技术依靠的是物(wù)理(lǐ)方法，细胞表面的分(fēn)子特性对電(diàn)转影响比较小(xiǎo)。相比化學(xué)转染方法和病毒载體(tǐ)转染方法，電(diàn)转可(kě)以用(yòng)在所有(yǒu)的细胞种类上，而且容易定量控制。
细胞電(diàn)转電(diàn)场图 1 细胞膜近似绝缘體(tǐ)，细胞附近電(diàn)转液中電(diàn)流扭曲。 2 在串联電(diàn)路中電(diàn)阻越大分(fēn)到電(diàn)压越大，细胞两端電(diàn)压基本都落在两端细胞膜上。 3 只有(yǒu)一个细胞端面電(diàn)转有(yǒu)效。 4 细胞质内分(fēn)到電(diàn)压很(hěn)小(xiǎo)，DNA電(diàn)转进入细胞膜后马上停止，后续靠细胞本身机制慢速扩散。 5 细胞核两端電(diàn)压及其微小(xiǎo)，微小(xiǎo)的電(diàn)压又(yòu)落在核膜上，核内部完全没有(yǒu)電(diàn)压，電(diàn)转没有(yǒu)基因毒性。 |
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应用(yòng)领域
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• 细菌、酵母及其他(tā)微生物(wù)的電(diàn)转化 | • 导入药物(wù)、蛋白、抗體(tǐ)等分(fēn)子对细胞的结构和功能(néng)进行研究 | • 细胞杂交、融合基因导入 |
• 导入标记基因起到标记、指示的作用(yòng) | • 哺乳动物(wù)细胞的转染、植物(wù)组织和原生质體(tǐ)质體(tǐ)的转染 |
产品特点
• 转化率高 转化时间短、重复性优异 | • 智能(néng)储存 可(kě)存储实验日志(zhì)，并且自定义程序无限量存储 |
• 控制精准 采用(yòng)微处理(lǐ)器控制的脉冲放電(diàn) | • 外形美观 整机一體(tǐ)化设计，显示直观，操作简单 |
实验介绍
1、LI J等人基于高通量筛选分(fēn)析p53–MDM2蛋白相互作用(yòng)的小(xiǎo)分(fēn)子抑制剂的研究结果。 | 2、ZHANG S Y等人发现和鉴定一个独特的G蛋白偶联受體(tǐ)119激动剂的研究结果 | |
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1、LI J, ZHANG S, GAO L, et al. A cell-based high-throughput assay for the screening of small-molecule inhibitors of p53-MDM2 interaction [J]. Journal of biomolecular screening, 2011.
2、ZHANG S Y, LI J, XIE X. Discovery and characterization of novel small molecule agonists of G protein-coupled receptor 119 [J]. Acta pharmacologica Sinica, 2014.
不同菌种的转化率
| 品种 | 品种 | 電(diàn)容 | 電(diàn)阻 | 导入盒 | 转化率 | 反馈用(yòng)户名 |
| 酵母 | 1200-1500V | 25µF | 200-400Ω | 2mm | 2.2-3.2*10²cfu/ug DNA | 上海肺科(kē)医院 |
| 大肠杆菌 | 1250V | 5µF | 400-1000Ω | 1mm | 10 -10 cfu/ug DNA | 清华大學(xué) |
| 大肠杆菌 | 1100V | 5µF | 500Ω | 1mm | 2500cfu/ug DNA | 清华大學(xué) |
| 大肠杆菌 | 1500V | 25µF | 400Ω | 2mm | 2500cfu/ug DNA左右 | 解放军总医院 |
| 羊细胞 | 250V | 500µF | 500Ω | 4mm | 10²cfu/ug DNA | 中科(kē)院发育所 |
| 毕赤酵母 | 1500V | 25µF | 400Ω | 2mm | 1.8x10³cfu/ug DNA | 华东师范大學(xué) |
| 枯草(cǎo)芽孢杆菌 | 1250V | 25µF | 400Ω | 2mm | 10²cfu/ug DNA | 华东师范大學(xué) |
备注：因各单位实验条件不尽相同，以上实验参数仅供参考
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